微生物可(kě)以低(dī)溫保存(cún)，低溫(wēn)保(bǎo)存(cún)法有廣泛的(dí)微生(shēng)物(wù)保存法。對(duì)於需要雜亂(luàn)養分的(dí)微生(shēng)物(wù)種(zhǒng)，如果不能堅持其生命力(如植物(wù)病原性(xìng)真(zhēn)菌(jūn))的其(qí)他儲存方(fāng)法(fǎ)，一般(bān)可(kě)以低(dī)溫(wēn)保存。

　　這種方法(fǎ)是以較慢的冷凍(dòng)速(sù)度(1℃/分鐘(zhōng))冷(lěng)凍存在於小管(guǎn)或安瓿中的(dí)細胞，直到(dào)-150℃，然(rán)後(hòu)將這(zhè)些(xiē)小(xiǎo)管保存在(zài)-150℃。～-在196℃的(dí)液氮中(zhōng)。低溫冷(lěng)凍保護劑(jì)不(bù)同於(yú)冷凍幹(gān)燥法中使(shǐ)用的(dí)冷(lěng)凍(dòng)劑。甘油(10%)是ATCC常(cháng)見(jiàn)的(dí)一種，大(dà)多(duō)數細(xì)胞(bāo)株(zhū)由二(èr)甲(jiǎ)亞(5%)和培養(yǎng)液(yè)製(zhì)成的混合物(wù)保存。

　　這些化(huà)學物質進(jìn)入(rù)細(xì)胞(bāo)可以防(fáng)止內膜的冷凍損(sǔn)傷。在(zài)低溫(wēn)容器(qì)中保(bǎo)存細胞(bāo)恢復時，需要小心操(cāo)作。當管道被加(jiā)熱時，形成(chéng)的霜會殺死(sǐ)細胞，正(zhèng)確(què)操作可以(yǐ)防(fáng)止(zhǐ)這種(zhǒng)麻(má)煩。隻有(yǒu)快(kuài)速凍結樣(yàng)品(pǐn)，才能減(jiǎn)少(shǎo)活力(lì)的(dí)喪失。方法是(shì)將密(mì)封的管(guǎn)道(dào)迅速(sù)放(fàng)入37℃的水中，直(zhí)到(dào)所有的(dí)冰都溶(róng)解(jiě)，然後(hòu)打開管口，將內容物(wù)移(yí)入培養液。低溫保(bǎo)存(cún)的(dí)微(wēi)生物(wù)需(xū)要保存(cún)在非常(cháng)低溫(wēn)的(dí)環境中，所(suǒ)以(yǐ)需要液氮(dàn)罐。在長(cháng)期(qī)儲(chǔ)存過程(chéng)中，需要(yào)經常注意液氮的(dí)填充。

　　與凍幹法(fǎ)相比，這(zhè)種儲存(cún)方(fāng)法需(xū)要(yào)更(gēng)多(duō)的資金，包(bāo)括(kuò)勞(láo)動力(lì)和(hé)液氮等，以(yǐ)保(bǎo)持(chí)儲存(cún)溫(wēn)度(dù)。金鳳液氮罐

　　1數據病(bìng)毒(dú)低(dī)溫保(bǎo)管所需數(shù)據包括：熱(rè)收(shōu)縮塑(sù)料管(guǎn)，液氮(dàn)罐(guàn)，防護(hù)手(shǒu)套及麵(miàn)罩，標(biāo)記(jì)筆，氣(qì)體噴燈，液氮保(bǎo)溫(wēn)瓶。

　　2方法(fǎ)

　　(1)剪一段(duàn)兩端各超(chāo)過冷凍管長度2cm的熱縮塑(sù)料管。金鳳液氮罐

　　(2)將(jiāng)含有清(qīng)除(chú)病(bìng)毒懸(xuán)液(安(ān)排培(péi)養的(dí)上清培養液，或(huò)安(ān)排培養液中(zhōng)的(dí)細(xì)胞(bāo)溶(róng)解物(wù))的(dí)上清懸(xuán)液冷卻(què)幾分鐘(zhōng)，用(yòng)殺菌移液(yè)管將(jiāng)0.2ml冷卻(què)後(hòu)的上(shàng)清懸液分配到(dào)冷(lěng)凍管中，並(bìng)擰(níng)緊(jǐn)蓋(gài)子。

　　將病毒冷凍管(guǎn)放(fàng)入熱收縮(suō)塑料(liào)管(guǎn)中(zhōng)，刺入(rù)正確(què)的標簽(qiān)。

　　(4)用噴燈(dēng)小(xiǎo)心加熱(rè)收縮塑(sù)料管，並(bìng)將其(qí)包裹(guǒ)在冷(lěng)凍管中。切記(jì)不要(yào)在過(guò)高(gāo)的(dí)溫(wēn)度下加熱收(shōu)縮(suō)塑(sù)料管(guǎn)。

　　再(zài)次(cì)小心(xīn)加熱(rè)收縮塑料管(guǎn)的(dí)兩端，用(yòng)大(dà)鑷子將管端(duān)口(kǒu)夾緊(jǐn)至完全(quán)密封(fēng)。

　　(6)在配(pèi)有液(yè)氮(dàn)的保溫瓶中快(kuài)速冷(lěng)凍密封的(dí)冷凍(dòng)管(操作(zuò)時(shí)需戴口罩和手(shǒu)套)。

　　(7)將(jiāng)冷凍冷凍管放入液氮(dàn)罐(guàn)內的格(gé)子中，一起(qǐ)記錄樣品(pǐn)的(dí)具體存(cún)放方(fāng)向(xiàng)，實驗(yàn)編號(hào)，存(cún)放(fàng)日期等。

　　(8)需求(qiú)耗時，從(cóng)液(yè)氮罐(guàn)中快(kuài)速取(qǔ)出所需樣品(pǐn)，放入37℃水浴箱(xiāng)冷(lěng)凍(dòng)後(hòu)，用(yòng)解(jiě)剖(pōu)刀將熱(rè)收(shōu)縮(suō)塑(sù)料(liào)管(guǎn)用冷凍管的矽(guī)化墊圈(quān)切開。擰開冷(lěng)凍管的(dí)蓋子時(shí)，不需(xū)要(yào)去除熱(rè)收縮塑料(liào)管(guǎn)。